不同油脂合併枸杞萃取物補充對化學藥物誘發大鼠肝發炎與纖維化調節之影響

研究計畫: A - 政府部門b - 科技部

說明

衛生福利部統計於民國101年國人十大死因之第七名為慢性肝病及肝硬化,4,975人 死於慢性肝炎與肝硬化,台灣約2.5-3百萬人為B型肝炎帶原者,而B型肝炎與肝硬化或 肝癌的形成有密切的相關性,因此肝炎的預防與治療成為國內重點研究之一。之前本實 驗室研究發現枸杞與熟地萃取物複方可明顯改善四氯化碳(CCl4)誘發肝傷害大鼠之肝功 能指標,與減輕因四氯化碳引起之肝發炎與肝纖維化情形。枸杞為茄目茄科枸杞屬植 物,其果實為枸杞子,主要藥用種類為寧夏枸杞(Lycium barbarum L.),主要具生理調節 作用之有效成分包括多醣體(polysaccharides)、玉米黃質(zeaxanthine)、甜菜鹼(betaine)、 腦苷酯 (cerebrosides)、牛磺酸 (taurine)、東莨萣素 (scopoletin)、吡咯衍生物 (pyrrole derivatives),及微量元素,如鋅、鐵、銅。研究顯示枸杞萃取物與其有效成分具有活血、 降低血糖、抗脂肪肝、抗動脈粥狀硬化的活性,可益精明目與滋補肝腎。另研究顯示富 含單元不飽和脂肪酸之橄欖油可保護非酒精性脂肪肝炎,並減緩肝纖維化情形,其具有 抗發炎、抗氧化、調節免疫,及調節肝臟再生之功能,其與橄欖油中油酸(oleic acid)、 多酚類,如水合酪胺酸(hydroxytyrosol)、角鯊烯(squalene)、木質素(lignins)及其他微量 成分有關。因此本計畫分三年執行,分別製備水溶性富含多醣體與非水溶性富含類胡蘿 蔔素之枸杞萃取物,分析不同枸杞萃取物成分,及以細胞實驗篩選對活化肝星狀細胞抗 纖維化較有效之枸杞萃取物(第一年),以動物實驗探討不同油脂(橄欖油與大豆油)合併 枸杞萃取物對四氯化碳誘發肝傷害大鼠肝發炎反應與肝纖維化之影響(第二年),並以細 胞實驗探討食用油中主要脂肪酸與枸杞萃取物對鼠科動物巨噬細胞發炎反應,肝星狀細 胞纖維化形成與細胞凋亡作用訊號傳遞之調節機制(第三年)。 第一年以熱水與有機溶劑分別萃取寧夏枸杞果實之有效成分,並分析水溶性與非 水溶性枸杞萃取物之總醣類、粗蛋白、粗脂肪、水分、灰分、單醣、總多酚、類胡蘿蔔 素組成分,以大鼠肝星狀細胞株(HSC-T6細胞)作為細胞模式,以 H2O2刺激 HSC-T6細 胞活化後,探討不同枸杞萃取物(0-1,000 g/mL)對活化之 HSC-T6細胞存活率、細胞毒 性及纖維化調節分子之影響,並篩選最具潛力有效抗肝纖維化之枸杞萃取物作為第二年 動物實驗之介入物。第二年將雄性 Sprague-Dawley大鼠隨機分成七組:正常組、對照組 I (注射四氯化碳誘發肝損傷,給予含 5%大豆油飲食)、對照組 II (注射四氯化碳誘發肝 損傷,給予含 5%橄欖油飲食)、對照組 III (注射四氯化碳誘發肝損傷,給予含 2.5%大豆 油+2.5%橄欖油飲食)、大豆油+枸杞萃取物實驗組 I (注射四氯化碳誘發肝損傷,給予含 5%大豆油飲食+0.1% (w/w; 50 mg/kg bw)枸杞萃取物)、橄欖油+枸杞萃取物實驗組 II (注 射四氯化碳誘發肝損傷,給予含 5%橄欖油飲食+0.1% (w/w; 50 mg/kg bw)枸杞萃取物)、 大豆油/橄欖油+枸杞萃取物實驗組 III (注射四氯化碳誘發肝損傷,給予含 2.5%大豆油 +2.5%橄欖油飲食+0.1% (w/w; 50 mg/kg bw)枸杞萃取物)。於誘發肝損傷之前一週預先給 予油脂或/和枸杞萃取物後,腹腔注射四氯化碳誘發肝損傷,共注射七週。實驗期八週後, 分析肝病理切片之肝細胞壞死、脂質變性、發炎及纖維化等肝損傷情形,並分析血漿肝 功能指標、血脂質與肝脂質、血漿與肝臟發炎調節分子、肝纖維化調節分子、肝細胞凋 亡,及細胞凋亡調節分子表現。第三年以大鼠肝星狀細胞株(HSC-T6 細胞)與小鼠巨噬 細胞株(RAW 264.7細胞)作為細胞模式,於培養液中添加不同濃度之油酸(0-200 M)、 亞麻油酸(0-200 M)或/和枸杞萃取物(0-1,000 g/mL)對 HSC-T6與 RAW 264.7細胞存活 率與細胞毒性之影響,以脂多醣誘發發炎反應後,探討其對 RAW 264.7細胞發炎反應訊 號傳遞之分子調節機制,及以 H2O2刺激 HSC-T6細胞活化後,探討其對活化之 HSC-T6 細胞纖維化形成與細胞凋亡訊號傳遞之分子調節機制。本計畫之結果可作為橄欖油與枸 杞萃取物輔助肝炎與肝纖維化預防與治療臨床試驗之依據。
狀態已完成
有效的開始/結束日期8/1/147/31/15

Keywords

  • 橄欖油
  • 枸杞萃取物
  • 發炎反應
  • 肝纖維化
  • 訊號傳遞