從具有高效價抗蛇毒多株IgY抗體的雞隻製備單鏈變異區片段(scFv)單株抗體的研究

研究計畫: A - 政府部門c - 衛生福利部暨其附屬機構

說明

利用抗蛇毒血清來進行免疫治療是目前對抗毒蛇咬傷唯一有效的方法,抗蛇毒抗體通常是由注射過去活性蛇毒蛋白的動物身上,收集免疫血清所產生的。血清中的多株抗體可以結合並且中和蛇毒蛋白中的有毒成分,不過,動物血清製品會在人體中產生有害的副作用,例如:過敏性休克(anaphylactic shock reactions)、血清病(serum sickness)以及補體反應(complement reactions)。為了減少這類抗蛇毒治療的副作用,獲得相當高純度形式的抗蛇毒蛋白抗體是非常重要的。近年來科學家發現一種新的由雞產生的抗蛇毒抗體可以排除以上所提及的併發症,並且可以有效地製備只含有對蛇毒蛋白具有特異性的抗體製劑。演化上來自於IgG抗體先驅物的雞隻IgY抗體可以從雞蛋中大量抽取出來,每顆雞蛋平均大約可得到100 mg的IgY抗體,而且,其中所含的抗原特異性抗體有時候可以高達15%左右。更重要的是,蛋黃中的IgY抗體不會活化哺乳類動物的補體系統,或與可以調節發炎反應的哺乳類Fc接受器反應。曾有報告指出,注射巴西蛇毒的白色來亨雞可以產生辨識、結合,且更進一步中和蛇毒蛋白中有毒且足以致命的成分。由免疫過的雞隻所產生的雞蛋蛋黃,長久以來,即被認為是多株抗體的一項相當好的來源,因此與傳統重哺乳類血清中取得抗體的方法比較之下,母雞提供了一種更合乎衛生、更節省成本、更方便以及更大量的多株抗體的來源。除了多株抗體外,具有高特異性與結合能力的單株抗體在很多科學領域中更具有吸引力及價值,目前製備單株抗體的方法主要是以融合瘤方法(hybridoma)與噬菌體展現抗體技術(phage display antibody technology)。一旦抗蛇毒蛋白的單株抗體能夠經由抗體製造技術的巨大改進而產生出來,它們將成為一種更好特異性與更高品質的抗體。因此,不但馬與細胞培養的使用可以避免掉之外,也可以達到低成本與高品質的抗體製品。 我們先前的研究利用去活化的蛇毒蛋白來免疫雞隻,以刺激高效價的蛇毒IgY多株抗體的產生,目前已經從這些被免疫的雞隻所生產的雞蛋中大量地純化這些IgY抗體,由Coomassie blue所染色的SDS-PAGE上,可以清楚的偵測到一條主要的蛋白區域,約具有180kd的分子量。這種結果可以說明,這些純化的IgY多株抗體的純度是相當高的。我們正在測試他們對蛇毒蛋白的結合特異性,一旦我們可以確認很強的IgY抗體反應已經被激發出來,這些免疫過的雞隻將被犧牲,並且它們經過蛇毒抗原刺激的脾臟會被用來建構抗體的基因庫。在本年度的工作中,我們將繼續先前的研究,從這些建構好的抗體基因庫中,來大量篩選以及定性一系列的單鍊變異區片段scFv單株抗體。這些scFv單株抗體的特異性將利用ELISA、Western blotting、immunodisfussion、膠體電泳等技術來驗證,也會測試純化的scFv抗體中和蛇毒LD50的力價,並且進行動物實驗測試這些抗體是否可以保護老鼠在注射蛇毒蛋白後而造成的死亡。
狀態已完成
有效的開始/結束日期1/1/1112/31/11

Keywords

  • 抗蛇毒抗體免疫治療
  • 免疫球蛋白Y
  • 單鏈變異區片段抗體
  • 噬菌體展現抗體技術