利用HAX-1條件式腎臟基因剃除鼠探討HAX-1在抗癌藥物cisplatin引發腎臟衰竭中所扮演之分子和病理之角色(3-3)

研究計畫: A - 政府部門b - 科技部

說明

Cisplatin為應用於治療腫瘤及某些白血病的DNA alkylating藥劑,但卻會造成腎臟毒性,其主要原因是造成腎臟上皮管狀細胞的細胞凋亡或是壞死。近年來,新的蛋白質HAX-1被發現與粒線體通透性及細胞內鈣離子過量之細胞凋亡相關,但HAX-1並非只具有抗細胞凋亡的功能,在腦部及心臟方面的研究顯示HAX-1也具有非細胞凋亡相關之調節功能。從我們過去的研究顯示,cisplatin所產生ROS會抑制HAX-1表現並且導致腎臟上皮管狀細胞的細胞凋亡。由於HAX-1基因剔除鼠在出生後五週左右即會死亡,因此利用傳統HAX-1基因剔除鼠研究cisplatin對腎臟造成的傷害與HAX-1的關係無法順利進行,基於以上因素,我們將利用HAX-1腎臟條件剔除鼠來探討cisplatin所造成的腎衰竭過程中HAX-1以及其下游之鈣離子訊號傳遞路徑的調控機制,因此,在此計畫中,我們預期釐清以下問題: (1) 在HAX-1腎臟條件剔除鼠,cisplatin所造成的腎臟損傷過程中HAX-1所扮演之生理角色為何? 保護或傷害? (2) 在腎臟受到cisplatin的傷害時,HAX-1之訊息傳遞路徑為何? 為達到以上目的,我們預期達到以下目標: 目標1: 研究HAX-1在cisplatin造成之腎衰竭中所受到的調控方式 首先,我們將分析在cisplatin所造成的腎臟損傷過程中,HAX-1的基因及蛋白質表現是否受到調控,進而進一步探討影響HAX-1表現的轉錄因子,若HAX-1之基因表現在cisplatin所造成的腎臟損傷過程中並未見明顯差異,則探討在此過程中HAX-1是否發生細胞內蛋白質異位或是降解。 目標2: 分析HAX-1在腎衰竭中所扮演之病理或生理角色 Cisplatin 所產生ROS進而導致粒線體失去功能在cisplatin所造成的慢性腎衰竭傷害中為一重要因素,因此,過量表現HAX-1或是利用HAX-1條件式腎臟基因剔除鼠進一步了解在腎臟損傷中,HAX-1是否能預防或是改善腎臟受損為重要的課題,因此,本計劃擬利用HAX-1腎臟條件剔除鼠與正常小鼠比較,從病理,腎功能受損現象及細胞凋亡程度方面來探討cisplatin對腎臟所造成的傷害中,HAX-1所扮演之角色。最後,再利用Lentivirus將HAX-1送入HAX-1腎臟條件剔除鼠探討HAX-1於腎臟中所扮演之角色。 目標3: 探討腎臟在cisplatin處理後HAX-1之訊息傳遞路徑 最後,為了探討HAX-1在腎臟經cisplatin處理後的訊息傳遞路徑,我們會將不同splicing from的 HAX-1送入腎臟細胞株或老鼠中,來探討HAX-1在腎臟細胞株或老鼠中與細胞凋亡基因如caspase, AKT, eNOS或調節鈣離子相關基因如SERCA2, RYR2的關係,同時我們也將利用yeast two hybridization system去找其他一些尚未發現的HAX-1 associated protein來探討HAX-1在訊息傳遞路徑上可能所扮演之角色。 此研究若能受到行政院國家科學委員會資助,將能在毒理及腎臟生理學方面提供新的治療標的基因。同時,我們所使用的HAX-1基因轉殖鼠因在HAX-1基因帶有flox,因此可與具有其它組織專一性的Cre基因轉殖鼠交配,進而產生非腎臟HAX-1基因剔除鼠,做為提供於腎臟以外的器官探討HAX-1功能的有利工具。再者,我們對腎臟上皮細胞的HAX-1分子機制的研究能幫助進一步了解HAX-1之生理功能,並作為在cisplatin所導致的腎臟病變中之新的治療方向。
狀態已完成
有效的開始/結束日期8/1/127/31/13